Atelier 4
Cytométrie Multi-couleur
Olivier Jaen (Roissy CDG) et Christophe Duperray (Montpellier)
La cytométrie multi-couleur se répand dans plusieurs domaines comme l’immunologie, l’hématologie, la cancérologie. Néanmoins, la mise en œuvre de cette méthode requiert un minimum de compréhension et de prise en compte de nombreux phénomènes qui peuvent limiter la qualité des résultats obtenus.
Dans cet atelier, nous aborderons de manière théorique les problèmes potentiels auxquels un utilisateur est exposé, puis nous proposerons des solutions qui permettront de développer des panels robustes. Par ailleurs, nous rappellerons les étapes nécessaires pour réaliser une expérimentation de qualité. Au terme de la session théorique, nous réaliserons une partie pratique dans laquelle nous ferons les marquages et l’acquisition de tubes 10 couleurs. Le marquage réalisé visera à mesurer le pourcentage de cellules PD1+. Afin de pouvoir positionner le seuil négatif/positif, nous réaliserons les tubes fluorescences minus one (FMO). L’utilisation de ces derniers nous permettra de positionner ces seuils, sans subjectivité. Après les acquisitions, nous travaillerons dans un logiciel d’analyse des fichiers fcs. Dans cette analyse, nous réaliserons la fusion des fichiers FMO et marqués intégralement, afin d’apprécier la différence de capacité de mesure en fonction des combinaisons réalisées.
Au terme, de cet atelier, les participants repartiront avec une clef USB contenant la présentation, les fichiers fcs ainsi qu’une version trial du logiciel d’analyse.