JFPC 2014

Couplage Image et Flux

Christian Muller (Strasbourg)

Maladie résiduelle / Evènements rares

Marie-Christine Béné (Nantes)

Pause café - Visite exposition

Signalisation cellulaire en cancérologie

Lydia Campos (Saint-Étienne)

Microbiologie

Marielle Bouix (Thiverval-Grignon)

Evaluation seconde journée

Déjeuner - Visite exposition

Atelier 3

C4

Cytométrie multicouleur
Juliette Desfrancois-Noël

• Connaitre les nouveaux fluorochromes permettant de réaliser des matrices de 7/10 couleurs avec moins de compensation; propriétés et utilisation des brillant violet et des fluorochromes en tandem.
• Comment réaliser une bonne matrice de compensation automatique sur DIVA?; avec billes et/ou cellules.
• Trucs et astuces du logiciel DIVA en acquisition comme en analyse.

A4

Cytométrie multicouleur
Julie Cazareth

La cytométrie multicouleurs prend de plus en plus d’importance. la multiplication des sondes demande des compensations inter-couleurs importantes ce qui peut diminuer la sensibilté de l'analyse. Nous verrons comment optimiser ce type d'analyse et aborderons entre autre les points suivants :

• propriétés et utilisation des fluorochromes et des tandems,
• optimisation du choix des fluorochromes,
• comment réaliser une bonne matrice de compensation (manuelle et automatique),
• échantillons contrôles associés à la cytométrie multicouleurs (FMO).

Cet atelier est destiné aux personnes utilisant régulièrement et de facon autonome un cytomètre en flux.

A1

Qualité métrologie
ESQ / Amarok

A5

HPN
Bernard Drénou

L’atelier “HPN” est destiné aux cytométristes qui souhaitent acquérir ou approfondir leur connaissance sur la détection de cette maladie. Après une introduction comportant la physiopathalogénèse de l’HPN, l’intérêt du test à haute sensibilité et le travail effectué par le groupe HPN (workshop, comparaison interlaboratoire, observatoire), la formation détaillera l’analyse en routine des test sur les leucocytes et sur les hématies illustrée par des cas cliniques.

C3

Physiologie microbienne
Marielle Bouix

En microbiologie positive (ferments, produits fermentés et biotechnologie blanche), l’état du microorganisme-outil est fondamental. La cytométrie en flux, couplée à des marqueurs fluorescents permet de caractériser rapidement et simplement l’état cellulaire des microorganismes. On peut ainsi évaluer la vitalité cellulaire (activité spécifique), mais aussi des paramètres membranaires comme l’intégrité, le potentiel trans-membranaire, la fluidité membranaire, la membrane conditionnant le fonctionnement cellulaire. On peut aussi mesurer le pH intracellulaire qui avec le potentiel transmembranaire joue un rôle important dans les échanges (force proton motrice). Des exemples de mesures de quelques paramètres pourront être présentés sur des bactéries ou des levures.

B4

Tri cellulaire
Laurence Talbot

L’objectif de cet atelier Tri est de vous présenter une démonstration pratique de l’utilisation d'un trieur (alignement, calcul du drop delay...) et de réaliser un tri 3 couleurs (choix des modes, compensation...). Les cellules pourront être triées sur lames et visualisées sous microscope à fluorescence.

B2

Maladie Résiduelle
Marie-Christine Béné

B3

Allergie en routine clinique
Patricia Amé-Thomas

La recherche de l’allergène incriminé lors d’une réaction allergique importante chez un patient est réalisée par les allergologues en première intention grâce à des tests cutanés et le dosage des IgE spécifiques circulantes. Cependant, dans certaines situations, ces examens ne permettent pas de conclure sur la nature du ou des allergènes responsables, et des tests d’activation in vitro des basophiles (TAB) peuvent être prescrits afin de proscrire ou avant un test de réintroduction de la substance suspectée comme responsable des manifestations allergiques. Ces TAB mettent en présence les polynucléaires basophiles avec l’allergène, la lecture du test est réalisée en cytométrie en flux en évaluant l’expression membranaire de marqueurs d’activation.

B1

Cytométrie en image et biologie marine
Nadège Marec

Analyse de globules de lipides neutres dans une souche de microalgue par Imagerie en flux : grâce au cytomètre Imageur, les globules de lipides neutres, marqués au Nile Red, peuvent être visualisés, dénombrés et les caractérisés. Lors de cet atelier, les participant pourront se familiariser avec le logiciel d’analyse IDEAS afin de traiter un jeu de données acquises sur la plateforme.

Stand 1

Evaluation de la toxicologie in-vitro par High Content Analysis
Ludivine Chapat

• Premier atelier : « Amélioration de la sensibilité en Neurotoxicité ». Il a été montré que l’évaluation précoce de la toxicité de composés chimiques sur le SNC pouvait être améliorer en utilisant des méthodes de quantification phénotypiques par rapport à une évaluation plus classiques de viabilité et de métabolisme sur des cultures de modèles in-vitro. La caractérisation de l’aspect morphologique et fonctionnel du réseau neuronal permet d’obtenir des réponses aux composés testés à des doses plus faibles et des temps d’incubation plus courts. Nous verrons lors de cet atelier comment utiliser un outil de cytométrie en image (microscopie automatisée de type High Content Screening) afin de quantifier les changements morphologiques et fonctionnels sur des cultures de neurones (croissance neuritique, ramification, synapotgénèse…).
• Deuxième atelier : « Avantage du multiplexage dans l’évaluation de la toxicité cellulaires ». L’un des goulots d’étranglement majeurs dans la découverte de nouvelles molécules thérapeutiques est l’évaluation de la toxicité induite par ces composés et le retrait tardif de ces molécules pendant les processus de mise au point du médicament ainsi que le retrait du marché de molécules déjà mises en circulation. Afin d’évaluer le risque potentiel de ces drogues plus tôt dans leur processus de développement et réaliser une économie importante, il existe des méthodes de caractérisation de la toxicité cellulaire sur différents modèles in-vitro. Le multiplexage de plusieurs sondes intra-cellulaires et l’observation des changements phénotypiques rendus possibles grâce à la technologie de cytométrie en image (microscopie automatisée de type High Content Screening) permet d’obtenir des tests rapides, plus sensibles et plus spécifiques.

C2

Kaluza / CXP
Mikaël Roussel

A3

Potentiel Mitochondrial
Jean-François Mayol

La dissipation du potentiel mitochondrial est une des étapes clé dans le processus d’apoptose. L’objectif de cet atelier est de donner les bases pour réaliser des marquages permettant de visualiser ce phénomène par cytométrie en flux. Les points importants permettant de réussir ces marquages seront passés en revue : choix du fluorochrome, détermination de la concentration optimale de fluorochrome, cinétique, conditions de marquage, co-marquages...

A3

Cytométrie multicouleur
Nicolas Bailly

L’objectif de cet atelier est de mettre en évidence les avantages, bénéfices, contraintes et limites de la cytométrie en flux multicouleur.
L’optimisation des expériences en multicouleur sera évoquée au travers des réglages des compensations, choix des fluorochromes (ainsi que leurs propriétés), aides apportées par les logiciels, choix et utilisation des lasers,...

Atelier 4

C3

Détection spécifique microbienne
Steve Crussard et Marielle Bouix

Depuis longtemps, la microbiologie s’est emparée de la Cytométrie en flux, notamment dans la numération et le suivi de viabilité microbienne. Dorénavant, l’immuno-détection de protéines spécifiques présente un intérêt grandissant. Dans cet atelier, 2 exemples seront présentés : en IAA, un protocole de recherche spécifique des levures viables dans les yaourts et en industrie pharmaceutique, un protocole de marquage comparatif à l’aide d’anticorps monoclonaux et de polyclonaux.

B2

Syndrome lymphoprolifératif B
Francine Garnache Ottou et Christophe Roumier

Nous vous proposons de faire le point sur l’apport diagnostic de l’immunophénotypage pour le diagnostic des syndromes lymphoproliféraifs B, de la LLC à la Leucémie à tricholeucocytes en passant par tous les autres !!!
Avec des proposition de marqueurs d’intérêts à réaliser, de stratégie d’analyse sur des cas concrets sur logiciel d’analyse et d’interprétation.

B3

Myélodysplasies
Carmen Aanei et Lydia Campos

A2

Microscopie et Hématologie
Bernard Chatelain

L'atelier revoit le réglage du microscope adapté à la capture d'images à des fins de télé-médecine. Il y sera évoqué les critères de choix d'un capteur mais également son réglage afin de numériser des images de qualité. L'utilisation de logiciels pour le traitement de ces images et la confection d'images de grands champs feront l'objet d'une démonstration pratique.

C4

Allergie Recherche
Claude Lambert

B4

Tri cellulaire
Laurence Talbot

L’objectif de cet atelier Tri est de vous présenter une démonstration pratique de l’utilisation d'un trieur (alignement, calcul du drop delay...) et de réaliser un tri 3 couleurs (choix des modes, compensation...). Les cellules pourront être triées sur lames et visualisées sous microscope à fluorescence.

B1

Apoptose en image et en flux
Isabelle Martins

C2

Kaluza G Acquisition

A3

Cycle cellulaire
Jean-François Mayol

L’objectif de cet atelier est de donner les bases pour l’analyse du cycle cellulaire par cytométrie en flux. Seront évoqués : le choix des fluorochromes, les protocoles de marquage, le réglage de l’appareil, l’élimination des doublets, l’interprétation des résultats.

C1

Diva / Infinicyt
Nicolas Bailly et Olivier Muñoz

L’analyse des données de cytométrie est un point crucial dans le rendu et l’interprétation des résultats. Durant cet atelier, deux logiciels spécifiques seront utilisés (FACSDiva et Infinicyt) depuis la base (stratégie de fenêtrage, interaction des fenêtres, statistiques) jusqu’aux principes avancés dans l’analyse multiparamétrique (analyses en composante principales, fusions de FCS, arc de maturation...).