Atelier 8
Microdosages de bio-marqueurs en multiplex par électrochemiluminescence
Muriel Andrieu et Karine Bailly
La technologie Meso Scale Discovery (MSD) permet la détection de biomarqueurs en format simplex et multiplex, en plaques 96-puits et 384-puits. Elle offre une bonne alternative aux essais LuminexT et CBA® pour étudier l’inflammation (cytokines et chimiokines), les phosphoprotéines et la signalisation intracellulaire, le cancer, les biomarqueurs vasculaires et de l’angiogénèse, le métabolisme, les maladies neurodégénératrices, etc.
Utilisant l’électrochemiluminescence, ces essais offrent une forte sensibilité et une gamme dynamique large allant jusqu’à 5 logs. Ils utilisent un petit volume d’échantillon et tolèrent bien les matrices complexes, permettant de travailler avec du serum/plasma, des surnageants cellulaires, des lysats cellulaires, des homogénats de tissus et tumeurs, de l’urine, du Lavage broncho-alvéolaire (LBA), du liquide céphalo-rachidien (LCR), etc. La sensibilité et la gamme dynamique des essais permettent de mesurer le niveau des biomarqueurs dans des échantillons sains (basal) versus malades sans avoir à faire de multiples dilutions, ce qui, combiné au multiplex, permet d’économiser du temps, de l’échantillon tout en réduisant le coût de l’essai.
Durant l’atelier, nous apprendrons à utiliser un kit MSD à travers la réalisation d’un kit cytokines multiplex en plaque 96-puits. Après une brève introduction à la technologie de l’électrochemiluminescence, nous préparerons la gamme et quelques échantillons puis nous les distribuerons dans la plaque MSD pré-coatée avec les anticorps de capture. Nous ajouterons ensuite les anticorps de détection puis nous lirons la plaque sur l’appareil MSD MESO QuickPlex SQ 120. Enfin, nous réaliserons l’exploitation des données afin de tracer les gammes et calculer la concentration des échantillons.