Atelier 3
No lyse - No Wash
Co-animatreurs : Jordi Petriz (Barcelone, Espagne) et Lidia Campos (Barcelona, Spain)
Public : Techniciens, ingénieurs, étudiants, chercheurs travaillant sur échantillons sanguins
Prérequis : recherche de population de globules blanc à partir de sang total
Les méthodes standard d’isolement et de détection des leucocytes (globules blancs) dans le sang total humain prennent beaucoup de temps et impliquent souvent une manipulation et un enrichissement importants avant l’analyse. Ces étapes de préparation de l’échantillon peuvent entraîner des altérations de la physiologie cellulaire et la perte des types de cellules d’intérêt. La focalisation acoustique, introduite avec le cytomètre en flux Invitrogen™Attune™, permet des taux de prélèvement d’échantillons élevés (jusqu’à 1 000 μL/min) sans aucune perte de résolution des données, éliminant ainsi le besoin d’enrichissement et de manipulation avant l’acquisition et permet la détection d’événements rares. Dans le sang total humain, les globules rouges sont plus nombreux que les globules blancs (1 000 fois). Cela crée deux obstacles dans la l’analyse des échantillons de sang total sans manipulation ni enrichissement : 1) la collecte d’un nombre suffisant d’événements de globules blancs pour des données statistiquement significatives, et 2) la différenciation des globules blancs des globules rouges étant donné la forte probabilité d’événements coïncidents de globules rouges. Nous présenterons plusieurs stratégies pour la détection des globules blancs dans le sang total à l’aide du cytomètre en flux Attune NxT.
- Stratégie 1 : basée sur les différences des propriétés de diffusion de la lumière entre les globules rouges rouge et leucocytes. La configuration du cytomètre permet la mesure simultanée de la dispersion latérale bleue et violette et la différenciation des globules rouges et des leucocytes.
- Stratégie 2 : utilisation d’anticorps fluorescents spécifiques des marqueurs exprimés par les globules rouges ou les leucocytes.
- Stratégie 3 : utilisation d’un colorant spécifique pour marquer les cellules nucléées, les globules rouges matures étant anucléés.